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小鼠谷胱甘肽-過氧化物酶(GSH-PX)酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用 目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中谷胱甘肽-過氧化物酶(GSH-PX)的含量。
實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠谷胱甘肽-過氧化物酶(GSH-PX)水平。用純化的小鼠谷胱甘肽-過氧化物酶(GSH-PX)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入谷胱甘肽-過氧化物酶,再與HRP標(biāo)記的GSH-PX抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的谷胱甘肽-過氧化物酶呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠谷胱甘肽-過氧化物酶(GSH-PX)的含量。
試劑盒組成:
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| (20ml×20倍)×1瓶 | | |
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為600U/L,400 U/L ,200 U/L,100 U/L,50 U/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
計(jì)算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),
在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋
倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值
代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋
倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
(此圖僅供參考)
試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。
2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%
檢測范圍:
15U/L -700 U/L
保存條件及期:
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.期:6個(gè)月
貨號(hào):JW-S51364
規(guī)格:5次
檢測樣本:動(dòng)物和人相關(guān)組織樣本
保存條件:低溫保存
庫存數(shù)量:大量
品牌:極威生物
供應(yīng)商:上海極威生物科技有限公司
溫馨提示:不可用于臨床治療
植物葡萄糖6-磷酸異構(gòu)酶(glucose-6-phosphate isomerase;GPI)電泳分析試劑盒訂購事項(xiàng):
1、當(dāng)天下午3點(diǎn)之前到款的,可當(dāng)天發(fā)貨。(除低溫保存物品外)
2、如在本網(wǎng)站沒有查詢到您所需要的產(chǎn)品,請來電咨詢客服人員。
3、品質(zhì)保障: 若本產(chǎn)品出現(xiàn)質(zhì)量問題,(非人為因素)本司可無條件退換貨。
4、(本品正在特價(jià)優(yōu)惠中),歡迎來電咨詢銷售人員獲取折扣價(jià)格。
注:本產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于其他用途,禁止用于臨床。
植物葡萄糖6-磷酸異構(gòu)酶(glucose-6-phosphate isomerase;GPI)電泳分析試劑盒及極威生物長期供應(yīng)產(chǎn)品種類:
長期為廣大高校及醫(yī)院等科研單位供應(yīng)各類產(chǎn)品試劑,產(chǎn)品種類齊全,包括:elisa試劑盒,細(xì)胞株,標(biāo)準(zhǔn)品,生物試劑,蛋白分子類,免疫學(xué)類,生物化學(xué)類,其中生物化學(xué)技術(shù)相關(guān)試劑類別如下:ATP酶活性定量試劑專題、甲戊二羥酸(MEVALONATE)通路分析試劑專題、乙酰化分析試劑專題、組織生物化學(xué)成分定量檢測試劑專題、脂類成分定量檢測試劑專題、金屬元素定量檢測試劑專題、脂肪酸β氧化檢測試劑專題、脂類代謝檢測試劑專題、膠原蛋白(collagen)代謝檢測試劑專題、PH檢測試劑專題等
極威生物產(chǎn)品使用承諾
上海極威生物有限公司秉著“極致追求,科學(xué)權(quán)威,客戶滿意,質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的廣大科研用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后,應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定,保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題,請立即以書面形式(實(shí)驗(yàn)報(bào)告)與本公司聯(lián)系,并將該產(chǎn)品退回,經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致,本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致,本公司不承擔(dān)由此造成的損失。
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JW-S52976植物源性食品杏仁(almond)基因檢測試劑盒
上海極威生物科技有限公司主要供應(yīng)試劑種類:ELISA試劑盒、細(xì)胞技術(shù)、分子技術(shù)、蛋白化學(xué)、免疫抗體、醫(yī)學(xué)技術(shù)、生物化學(xué)、血清、標(biāo)準(zhǔn)品、微生物、植物、載體、毒理、營養(yǎng)、平臺(tái)等等相關(guān)技術(shù)的各種大量試劑,歡迎廣大新老客戶前來咨詢選購,優(yōu)惠多多,折扣多多。
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ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時(shí),受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
產(chǎn)品特點(diǎn)二.實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制
1.儀器與材料:酶標(biāo)儀(使用前預(yù)熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。
2. 洗液的配制:按1:30的比例配制洗液備用。
標(biāo)本要求三.人血管生成素1(ANG-1)ELISA定量分析試劑盒樣品收集、處理及保存
1).細(xì)胞培養(yǎng)上清:
適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
2)細(xì)胞:
用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右,通過反復(fù)凍融,使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,或者細(xì)胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。
3)血清:
在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。
4)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
5)體液:
包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
6.)組織標(biāo)本:
切取組織標(biāo)本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進(jìn)行檢測。
樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
7)保存:
如果樣品不能立即檢測,應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
操作流程四.人血管生成素1(ANG-1)ELISA定量分析試劑盒操作步驟
1)取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。
2)分組:取出96孔板,根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(6個(gè)濃度)、空白孔、待測樣品組。
3)標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:準(zhǔn)備小試管6 只,依次編好號(hào)碼,先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第三只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第五只試管中,充分混勻;然后在該試管中取100ul,棄掉。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。
注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。
4)加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入50ul的蒸餾水;其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
5)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
6)洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒棄去,如此重復(fù)5 次,拍干。
7)加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液(空白對照孔除外)。
8)溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。
9)洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標(biāo)板5次,用吸水紙徹底拍干。
10)顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。
11)終止:25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,加入50ul終止液。
12)讀板:在450nm波長讀取各孔的OD值。
注:讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi),以免影響準(zhǔn)確性。
使用方法五.?dāng)?shù)據(jù)計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)六.人血管生成素1(ANG-1)ELISA定量分析試劑盒注意事項(xiàng)
1)實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。
2)加樣:加樣時(shí),要控制加樣速度,避免第一孔與最后一孔間的時(shí)間間隔過大,否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。
3)孵育:嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化,如果顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
4)建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
5)建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,試用幾個(gè)標(biāo)本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經(jīng)銷商聯(lián)系,如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
儲(chǔ)存方式七.保存條件及有效期
1.試劑盒保存:2-8℃
2.有效期:6個(gè)月
八.人血管生成素1(ANG-1)ELISA定量分析試劑盒訂貨說明
1)賣方確保所訂產(chǎn)品與目錄技術(shù)指標(biāo)保持一致;
2)為了確保買方產(chǎn)品在運(yùn)輸中的質(zhì)量,對有特殊要求的低溫產(chǎn)品予以濕冰運(yùn)輸。
3)收到貨物后如出現(xiàn)質(zhì)量問題,買方需在收到貨物一個(gè)月內(nèi)向賣方提出書面異議。買方逾期不提出異議,視為貨物符合其要求,賣方不付任何責(zé)任。
4)出現(xiàn)質(zhì)量以外的問題,如破損等,買方應(yīng)在收貨后一個(gè)周內(nèi)提出。買方未按時(shí)提出異議,視為該產(chǎn)品合格。
本公司對所有售出的產(chǎn)品保證質(zhì)量,并提供良好的售后服務(wù),有關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量的投訴,請?jiān)谑盏截浳锏?2天內(nèi)以書面形式提出,并向我公司技術(shù)人員提供相應(yīng)的材料,我們會(huì)及時(shí)派人解決。所有形式的賠償或退換僅限于產(chǎn)品本身,不涉及其他間接內(nèi)容。凡購買本公司任意款elisa試劑盒,均可享受免費(fèi)代測服務(wù),并提供技術(shù)指導(dǎo)。
100ul的清洗過的三氯甲烷相可以通過液體閃爍器進(jìn)行計(jì)數(shù)
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小鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA檢測試劑盒Mouse5-Nucleotidase,5-NTELISAKit 96T/48T
小鼠煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA檢測試劑盒Mousenicotinamideadeninedinucleotidephosphate,NADPHELISAKit 96T/48T
小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA檢測試劑盒MouseL-Phenylalanineammonla-lyase,PALELISAKit 96T/48T
小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原30配體(sCD30L)ELISA檢測試劑盒MouseSolubleClusterofdifferentiation30ligand,sCD30LELISAKit 96T/48T
小鼠α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA檢測試劑盒Mouseα2-Antiplasmin,α2-APELISAKit 96T/48T
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小鼠α半乳糖基抗體(Gal)ELISA檢測試劑盒Mouseα-galactoyl,GalELISAKit 96T/48T
小鼠β氨基己糖苷酶A(β-hexosaminidaseA)ELISA檢測試劑盒Mouseβ-hexosaminidaseAELISAKit 96T/48T
小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA檢測試劑盒Mouseβ-galactosidase,βGALELISAKit 96T/48T
小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISA檢測試劑盒Mouseβmannosidase,βManaseELISAKit 96T/48T
豬組織因子(TF)酶聯(lián)免疫分析試劑盒小鼠β內(nèi)酰胺酶抑制劑(BLI)ELISA檢測試劑盒Mouseβ-Lactamaseinhibitors,BLIELISAKit 96T/48T
小鼠β萘酚(β-naphthol)ELISA檢測試劑盒MouseBeta-naphtholELISAKit 96T/48T
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