使用范圍:僅供科研檢測,不得用于臨床.
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被大鼠一氧化碳(CO)ELISA檢測試劑盒捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠一氧化碳(CO)ELISA檢測試劑盒呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
大鼠一氧化碳(CO)ELISA檢測試劑盒性能特點
1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
2. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
4. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
5. 有效期:6個月
6. 檢測范圍:來電索取詳細(xì)說明書
elisa試劑盒樣本處理方法:
一、液體樣本
液體樣本處理原則:所有的液體樣本,用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),如果以后碰到其他的液體樣本,也按這個方法,納入?yún)R總表。
1、血清:用無菌管收集,室溫血液自然凝固10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3、尿液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
4、胸腹水:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5、腦脊液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
6、唾液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
7、細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
8、牛奶:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
9、蜂蜜:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
10、全血:用含有抗凝劑的無菌管收集,立即輕輕搖動,來回輕輕顛倒數(shù)次,使血液和抗凝劑混勻,以防血液凝固。
二、固體樣本
固體樣本處理原則:稱取1g的固體樣本,用9g的合適緩沖液溶解,分泌蛋白可以直接離心取上清檢測,細(xì)胞內(nèi)的蛋白,要先收集細(xì)胞,再用合適方法破碎,離心取上清測試。
1、組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。對于植物組織,不好勻漿的話,就在液氮中充分研磨;
2、細(xì)胞內(nèi)蛋白樣本
許多待測蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細(xì)胞內(nèi)的蛋白,這個時候,要先收集細(xì)胞,洗滌干凈,再破碎細(xì)胞,離心取上清。
(1)培養(yǎng)的細(xì)胞
A、動物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,使細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融(如果反復(fù)凍融,破碎效果不好,就采用超聲波破碎),以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
B、植物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,使細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設(shè)置破碎2s,冷卻30s的方式,充分破碎細(xì)胞,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)組織的細(xì)胞
切割標(biāo)本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細(xì)胞三遍。再用上述的細(xì)胞破碎方法破碎細(xì)胞。
3、土壤:稱取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工將標(biāo)本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細(xì)胞內(nèi)蛋白,要破碎細(xì)胞。
4、咽拭子:加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解咽拭子頭部,搖勻,用鑷子取出咽拭子并擠干液體,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細(xì)胞內(nèi)蛋白,要破碎細(xì)胞。
5. 植物標(biāo)本的精采集及保存
1、 稱取0.1g(誤差±3%以內(nèi))新鮮植物組織樣本,在液氮中充分研磨;
2、 加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20度過夜;
3、 于4度,8000rpm,離心1小時,取上清;
4、 上清液過C-18固相萃取柱。具體步驟是: 80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%乙mi(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循環(huán)。過柱后的樣本真空干燥或氮氣吹干,保存?zhèn)溆茫?/div>
5、 上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容)。混勻后室溫放置30分鐘,然后4度離心(8000rpm,15分鐘),取上清并暫時保存于4度待用。
6.植物標(biāo)本中相關(guān)酶或蛋白的測定:(粗提。
1、 新鮮植物組織請在液氮中充分研磨;
2、 加入樣品體積9倍的提取液(pH 7.4 PBS緩沖液),3、 請于4度,8000rpm,離心30分鐘,取上清并暫時保存于4度待用。
三、樣本收集注意事項
1、不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2、標(biāo)本采集后盡快進(jìn)行實驗,若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、我們羅列的是通用的樣本處理方法,無法涵蓋各種樣本,對于一些特殊樣本,建議實驗人員多參考已發(fā)表的文獻(xiàn),自行設(shè)計合理的樣本處理方法。
ELISA試劑盒計算解析方法例如:
計算方法示例:繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。將樣本的OD值為X值代入方程式,所得的Y值即是我們的樣本值。(如上圖所示)我司其他研發(fā)的ELISA試劑盒產(chǎn)品:
人半乳凝素3(GAL-3)ELISA試劑盒RJ11880規(guī)格48T/96T
大鼠CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β(CEBPβ)ELISA試劑盒RJ15181規(guī)格48T/96T
人整合素α2(ITGA2)ELISA試劑盒RJ14793規(guī)格48T/96T
小鼠趨化因子配體2(CCL2)ELISA試劑盒RJ17519規(guī)格48T/96T
猴松弛肽;松弛素(RLN)ELISA試劑盒RJ20831規(guī)格48T/96T
豬水通道蛋白1(AQP-1)ELISA試劑盒RJ18638規(guī)格48T/96T
小鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)ELISA試劑盒RJ17937規(guī)格48T/96T
倉鼠白介素2(IL2)ELISA試劑盒RJ18159規(guī)格48T/96T
綿羊白細(xì)胞介素2(IL-2)ELISA試劑盒RJ19967規(guī)格48T/96T
人脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1(APE1)ELISA試劑盒RJ14104規(guī)格48T/96T
大鼠增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒RJ16586規(guī)格48T/96T
大鼠磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒RJ15998規(guī)格48T/96T
小鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒RJ17814規(guī)格48T/96T
豚鼠結(jié)合珠蛋白(Hpt;HP)ELISA試劑盒RJ18081規(guī)格48T/96T
人熱休克因子1(HSF-1)ELISA試劑盒RJ13739規(guī)格48T/96T
山羊羥甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)ELISA試劑盒RJ20172規(guī)格48T/96T
豬血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒RJ18735規(guī)格48T/96T
食蟹猴胰高血糖素(GC)ELISA試劑盒RJ20898規(guī)格48T/96T
馬γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒RJ19440規(guī)格48T/96T
人可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA試劑盒RJ13141規(guī)格48T/96T
小鼠5羥基吲哚乙酸(5-HIAA)ELISA試劑盒RJ16719規(guī)格48T/96T
人胍基丁胺脲水解酶/凝集酶(AGMAT)ELISA試劑盒RJ12541規(guī)格48T/96T
人β-防御素1(HBD-1)ELISA試劑盒RJ11690規(guī)格48T/96T
小鼠DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)ELISA試劑盒RJ16779規(guī)格48T/96T
人黃體生成素受體(LHR)ELISA試劑盒RJ12664規(guī)格48T/96T
馬血管緊張素Ⅱ(ANGⅡ)ELISA試劑盒RJ19521規(guī)格48T/96T
人葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)ELISA試劑盒RJ13621規(guī)格48T/96T
小鼠維生素D3(VD3)ELISA試劑盒RJ17680規(guī)格48T/96T
大鼠甲狀腺鈉碘轉(zhuǎn)運體(NIS)ELISA試劑盒RJ15839規(guī)格48T/96T
大鼠維生素B12(VB12)ELISA試劑盒RJ16314規(guī)格48T/96T
山羊結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒RJ20152規(guī)格48T/96T
兔胃動素(MTL)ELISA試劑盒RJ21251規(guī)格48T/96T
人15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒RJ11123規(guī)格48T/96T
大鼠花生四烯酸(AA)ELISA試劑盒RJ15765規(guī)格48T/96T
大鼠甘氨酸(Gly)ELISA試劑盒RJ15663規(guī)格48T/96T
小鼠靜止素Q6硫基氧化酶2(QSOX2)ELISA試劑盒RJ17291規(guī)格48T/96T
小鼠白細(xì)胞介素4(IL-4)ELISA試劑盒RJ16956規(guī)格48T/96T
魚腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒RJ21726規(guī)格48T/96T
人毒性休克綜合征毒素1(TSST-1)ELISA試劑盒RJ12241規(guī)格48T/96T