使用范圍:僅供科研檢測,不得用于臨床.
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被大鼠內(nèi)毒素(ET)elisa試劑盒捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人硫酸皮膚素(DS)ELISA檢測試劑盒呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
人硫酸皮膚素(DS)ELISA檢測試劑盒性能特點
1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
2. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
4. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
5. 有效期:6個月
6. 檢測范圍:來電索取詳細(xì)說明書
elisa試劑盒樣本處理方法:
一、液體樣本
液體樣本處理原則:所有的液體樣本,用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),如果以后碰到其他的液體樣本,也按這個方法,納入?yún)R總表。
1、血清:用無菌管收集,室溫血液自然凝固10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3、尿液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
4、胸腹水:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5、腦脊液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
6、唾液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
7、細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
8、牛奶:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
9、蜂蜜:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
10、全血:用含有抗凝劑的無菌管收集,立即輕輕搖動,來回輕輕顛倒數(shù)次,使血液和抗凝劑混勻,以防血液凝固。
二、固體樣本
固體樣本處理原則:稱取1g的固體樣本,用9g的合適緩沖液溶解,分泌蛋白可以直接離心取上清檢測,細(xì)胞內(nèi)的蛋白,要先收集細(xì)胞,再用合適方法破碎,離心取上清測試。
1、組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。對于植物組織,不好勻漿的話,就在液氮中充分研磨;
2、細(xì)胞內(nèi)蛋白樣本
許多待測蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細(xì)胞內(nèi)的蛋白,這個時候,要先收集細(xì)胞,洗滌干凈,再破碎細(xì)胞,離心取上清。
(1)培養(yǎng)的細(xì)胞
A、動物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,使細(xì)胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融(如果反復(fù)凍融,破碎效果不好,就采用超聲波破碎),以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
B、植物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,使細(xì)胞濃度達到100萬/ml左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設(shè)置破碎2s,冷卻30s的方式,充分破碎細(xì)胞,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)組織的細(xì)胞
切割標(biāo)本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細(xì)胞三遍。再用上述的細(xì)胞破碎方法破碎細(xì)胞。
3、土壤:稱取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工將標(biāo)本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細(xì)胞內(nèi)蛋白,要破碎細(xì)胞。
4、咽拭子:加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解咽拭子頭部,搖勻,用鑷子取出咽拭子并擠干液體,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細(xì)胞內(nèi)蛋白,要破碎細(xì)胞。
5. 植物標(biāo)本的精采集及保存
1、 稱取0.1g(誤差±3%以內(nèi))新鮮植物組織樣本,在液氮中充分研磨;
2、 加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20度過夜;
3、 于4度,8000rpm,離心1小時,取上清;
4、 上清液過C-18固相萃取柱。具體步驟是: 80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%乙mi(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循環(huán)。過柱后的樣本真空干燥或氮氣吹干,保存?zhèn)溆茫?/div>
5、 上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容);靹蚝笫覝胤胖30分鐘,然后4度離心(8000rpm,15分鐘),取上清并暫時保存于4度待用。
6.植物標(biāo)本中相關(guān)酶或蛋白的測定:(粗提取)
1、 新鮮植物組織請在液氮中充分研磨;
2、 加入樣品體積9倍的提取液(pH 7.4 PBS緩沖液),3、 請于4度,8000rpm,離心30分鐘,取上清并暫時保存于4度待用。
三、樣本收集注意事項
1、不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2、標(biāo)本采集后盡快進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、我們羅列的是通用的樣本處理方法,無法涵蓋各種樣本,對于一些特殊樣本,建議實驗人員多參考已發(fā)表的文獻,自行設(shè)計合理的樣本處理方法。
ELISA試劑盒計算解析方法例如:
計算方法示例:繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。將樣本的OD值為X值代入方程式,所得的Y值即是我們的樣本值。(如上圖所示)我司其他研發(fā)的ELISA試劑盒產(chǎn)品:
雞脂多糖/內(nèi)毒素(LPS)ELISA試劑盒RJ20618規(guī)格48T/96T
人凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒RJ13578規(guī)格48T/96T
人糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)ELISA試劑盒RJ14039規(guī)格48T/96T
人可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體1(sVEGFR-1)ELISA試劑盒RJ13200規(guī)格48T/96T
人β-乙型溶血性鏈球(β-GBS)ELISA試劑盒RJ15042規(guī)格48T/96T
犬胰蛋白酶(TPS)ELISA試劑盒RJ19750規(guī)格48T/96T
犬肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)ELISA試劑盒RJ19717規(guī)格48T/96T
人鈣衛(wèi)蛋白(CALP)ELISA試劑盒RJ12395規(guī)格48T/96T
鴨瘦素(LEP)ELISA試劑盒RJ20693規(guī)格48T/96T
豚鼠促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒RJ18046規(guī)格48T/96T
大鼠睪酮(T)ELISA試劑盒RJ15695規(guī)格48T/96T
小鼠脂肪酸結(jié)合蛋白2(FABP2)ELISA試劑盒RJ17916規(guī)格48T/96T
植物金屬硫蛋白(MT)ELISA試劑盒RJ21815規(guī)格48T/96T
人凝血酶(TM)ELISA試劑盒RJ13560規(guī)格48T/96T
犬氨基-N-脫甲基酶(AND)ELISA試劑盒RJ19594規(guī)格48T/96T
斑馬魚白介素12B(IL12B)ELISA試劑盒RJ21478規(guī)格48T/96T
人信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子1(STAT1)ELISA試劑盒RJ14353規(guī)格48T/96T
人的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA試劑盒RJ12179規(guī)格48T/96T
倉鼠白介素1β(IL1β)ELISA試劑盒RJ18158規(guī)格48T/96T
大鼠核因子κB受體活化因子(RANK)ELISA試劑盒RJ15754規(guī)格48T/96T
雞磷脂酰乙醇胺(PE)ELISA試劑盒RJ20471規(guī)格48T/96T
人肥素(FTO)ELISA試劑盒RJ12323規(guī)格48T/96T
小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4ELISA試劑盒RJ17737規(guī)格48T/96T
人中性粒細(xì)胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA試劑盒RJ14850規(guī)格48T/96T
牛色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒RJ19234規(guī)格48T/96T
鴨白介素10(IL-10)ELISA試劑盒RJ20661規(guī)格48T/96T
小鼠調(diào)節(jié)活化蛋白(Rantes)ELISA試劑盒RJ17652規(guī)格48T/96T
大鼠錳超氧化物歧化酶(Mn-SOD;SOD2)ELISA試劑盒RJ16030規(guī)格48T/96T
人天青殺素/肝素結(jié)合蛋白(AZU/HBP)ELISA試劑盒RJ14073規(guī)格48T/96T
鵝環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒RJ20731規(guī)格48T/96T
人抗紡錘體抗體(MSA)ELISA試劑盒RJ12951規(guī)格48T/96T
兔結(jié)締組織生長因子(CTGF)ELISA試劑盒RJ21133規(guī)格48T/96T
人Ⅳ型前膠原肽(PⅣNP)ELISA試劑盒RJ11206規(guī)格48T/96T
人吡啶交聯(lián)物(PY)ELISA試劑盒RJ11901規(guī)格48T/96T
人谷氨酰半胱氨酸連接酶調(diào)控亞基(GCLM)ELISA試劑盒RJ15047規(guī)格48T/96T
人抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA/TMAB)ELISA試劑盒RJ12992規(guī)格48T/96T
土壤三-酮脂酰-輔酶A硫解酶ELISA試劑盒RJ22281規(guī)格48T/96T
人去乙酰化酶Sirtuin2(SIRT2/SIR2L/SIR2L2)ELISA試劑盒RJ13712規(guī)格48T/96T
魚游離膽固醇(FC)ELISA試劑盒RJ21718規(guī)格48T/96T