北京方程生物:ELISA試劑盒免費代測,一周內(nèi)出實驗結(jié)果。
人磷酸果糖激酶(人PFK)ELISA檢測試劑盒價格 Human Phosphofructokinase,PFK ELISA Kit 北京方程生物 人 大鼠 小鼠 elisa試劑盒價格
北京方程生物主營產(chǎn)品:ELISA試劑盒、蛋白組學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)類等科研產(chǎn)品與國內(nèi)各大高校,生產(chǎn)廠商,醫(yī)院,研究所以及多家企業(yè)建立了合作關(guān)系,專業(yè)的品質(zhì),的售后服務(wù),歡迎來電。
FU-R1692 人磷酸果糖激酶(PFK)ELISA試劑盒 Human Phosphofructokinase,PFK ELISA KIT FU-R1693 人富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)ELISA試劑盒 Human CYR61 Cysteine-rich protein 61 ELISA Kit FU-R1694 人細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)ELISA試劑盒 Huma extracellular signal -regulated kinase,ERK ELISA Kit FU-R1695 人骨骼肌受體酪氨酸激酶(MUSK)ELISA試劑盒 Huma Musclespecific tyrosine kinase, MuSK ELISA kit FU-R1696 人堿性成纖維細胞生長因子受體(bFGFR)ELISA試劑盒 Human bFGFR ELISA Kit FU-R1697 人脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP4)ELISA試劑盒 Human FABP4 ELISA Kit FU-R1698 人肽聚糖識別蛋白(PGRP-S)ELISA試劑盒 Human PGRP-S ELISA kit FU-R1699 人1,25二羥基維生素D3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3)ELISA試劑盒 Human 1,25-dihydroxyvitamin D3,DVD/DHVD 3 ELISA Kit FU-R1700 人1,3-二磷酸甘油酸(1,3-DPG)ELISA試劑盒 Human 1,3-Disphosphoglycerate,1,3-DPG ELISA Kit FU-R1701 人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA試劑盒 Human 1,3-βD glucosidase,1,3-βD-Glu ELISA Kit FU-R1702 人1,5-脫水葡萄糖醇/1,5-脫水山梨(1,5-AG)ELISA試劑盒 Human 1,5-anhydroglucitol,1,5-AG ELISA Kit FU-R1703 人11去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試劑盒 Human 11-dehydro-thromboxane B2,11-DH-TXB2 ELISA Kit
人磷酸果糖激酶試劑盒,人PFK ELISA Kit,北京elisa價格 說明書 北京方程生物權(quán)威ELISA試劑盒供應(yīng)商,質(zhì)量,無效退款。
樣品類型 血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清等樣品類型 檢測方法 酶聯(lián)免疫法
特 異 性 公司ELISA試劑盒具有較高的靈敏度和出色的特異性交叉反應(yīng) 由于當(dāng)前的酶聯(lián)免疫科學(xué)技術(shù)和知識有限,現(xiàn)有技術(shù)不可能完成藥物檢測的靶抗原之間和所有其他物種的類似物。因此,交叉反應(yīng)可能仍然存在 樣 本 量 50-100 μL 實驗時間 1–4.5h 儲存條件 2-8°C 儲存方法 可以存儲在2 - 8°C長達1個月(專家建議:4°C恒溫保存,酶免試劑盒實驗效果更佳)。對于長期存儲,在-20°C的存儲。盡量保持試驗板在密封鋁箔袋,避免潮濕 有 效 期 6 months 工作原理人角化細胞內(nèi)分泌因子(KAF)elisa試劑盒的原理 ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達到很高的敏感度。產(chǎn)品選型人角化細胞內(nèi)分泌因子(KAF)ELISA試劑盒的類型 ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑:(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent);(2)酶標記的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate);(3)酶反應(yīng)的底物。根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。用于臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型:雙抗體夾心法測抗原操作流程雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法,操作步驟如下:(1) 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。(2) 加受檢標本,保溫反應(yīng)。標本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。(3) 加酶標抗體,保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關(guān)。(4) 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色,測知標本中抗原的量。在臨床檢驗中,此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清,包被和酶標用的抗體最好分別取自不同種屬的動物。如應(yīng)用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應(yīng),作一步檢測。 在一步法測定中,當(dāng)標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結(jié)合,而不再形成"夾心復(fù)合物"。類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象,此時反應(yīng)后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標準曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同(參見1.3.2,圖1-4),如按常法測讀,所得結(jié)果將低于實際的含量,這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應(yīng)(hook effect),因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應(yīng)嚴重時,反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(zhì)(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時,應(yīng)注意可測范圍的最高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。 假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇,例如HBsAg的a決定簇,也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結(jié)合物。但在HBsAg的檢測中應(yīng)注意亞型問題,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型,雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應(yīng)性,這也是用單抗作夾心法應(yīng)注意的問題。 雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風(fēng)濕因子(RF)的干擾。RF是一種自身抗體,多為IgM型,能和多種動物IgG的Fc段結(jié)合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF,它可充當(dāng)抗原成份,同時與固相抗體和酶標抗體結(jié)合,表現(xiàn)出假陽性反應(yīng)。采用F(ab')或Fab片段作酶結(jié)合物的試劑,由于去除了Fc段,從而消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響,已被列為這類試劑的一項考核指標。 雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原,但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能形成兩位點夾心。應(yīng)用領(lǐng)域人角化細胞內(nèi)分泌因子(KAF)ELISA試劑盒的試劑準備按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。 ELISA 中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH 計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。試劑的準備之加樣在 ELISA 中一般有3 次加樣步聚,即加標本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。加標本一般用微量加樣器,按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標本應(yīng)更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法 ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標本,然后在微型震蕩器上震蕩 1 分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。
硝基呋喃類藥物因有非常好的抗菌作用和藥動力學(xué)的特性,曾經(jīng)被廣泛應(yīng)用,作為禽類、水產(chǎn)和豬促生長的添加劑。但在長時間的實驗研究過程中發(fā)現(xiàn),硝基呋喃類藥物和代謝物均可以使實驗動物發(fā)生癌變和基因突變,正因為如此才導(dǎo)致此類藥物禁止在治療和飼料中使用。呋喃它酮在1995年被禁用。
用來檢測呋喃它酮代謝物的最常用方法是LC-UV,LC-MS和LC-MS/MS。酶聯(lián)免疫方法結(jié)合了色譜技術(shù),采用AMOZ衍生物的特異性抗體,具有很高的精確度和靈敏度,較低的操作技術(shù)要求和短暫的檢測時間,檢測樣品量大等特點在檢測中很好的表現(xiàn)出來。
本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測產(chǎn)品,能最大限度地減少操作誤差和工作強度。
試驗原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在酶標板微孔條上預(yù)包被呋喃它酮代謝物抗原,樣品殘留的呋喃它酮代謝物和微孔條上預(yù)包被的抗原競爭抗呋喃它酮代謝物抗體,加入酶標二抗后,經(jīng)TMB底物顯色,樣品吸光度值與其殘留物呋喃它酮代謝物呈負相關(guān),與標準曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中呋喃它酮代謝物的含量。
關(guān)鍵參數(shù)
試劑盒靈敏度:0.1ppb
樣品最低檢測限: 0.2ppb
回收率: 85±10%
精密度:試劑盒的變異系數(shù)均小于10%。
交叉反應(yīng)率:
藥物名稱
交叉反應(yīng)率
呋喃唑酮代謝物
100%
呋喃它酮代謝物
<0.1%
呋喃西林代謝物
<0.1%
呋喃妥因代謝物
<0.1%
溫馨提示:不可用于臨床治療。詳細請咨詢:15370217635
Elisa供應(yīng)科研人抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)檢測試劑盒現(xiàn)貨,青島惟思生物所銷售的elisa試劑盒:品種多,質(zhì)量好,靈敏度高,售后服務(wù)完整,并提供免費代檢測服務(wù)!想要了解更多關(guān)于價格、Elisa試劑盒品牌、Elisa試劑盒廠家、Elisa試劑盒說明書、Elisa試劑盒促銷信息,詳詢Elisa試劑盒專業(yè)客服QQ!【產(chǎn)品規(guī)格】96T/48T【產(chǎn)品保存】2~8℃低溫保存、有效期6個月【所需標本】血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等.【庫存狀態(tài)】現(xiàn)貨供應(yīng),訂單生成,立即安排發(fā)貨!臼褂梅秶績H供科研使用,不得用于臨床。【產(chǎn)品用途】用于測定人血清、血漿、組織及相關(guān)液體樣本中的含量或活性。【檢測種屬】大小鼠、人、豚鼠、兔子、豬、犬、牛羊、雞鴨ELISA試劑盒等種屬.ELISA試劑盒操作注意事項:(1).實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。(2).試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。(3).使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。(4).不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。(5).洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。(6).使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。(7).加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。(8).按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。(9).底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。青島惟思生物科技有限公司是一家專業(yè)從事生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)銷售的科技公司,經(jīng)營產(chǎn)品主要包括微生物培養(yǎng)基、對照品、標準品、標準菌株、ELISA試劑盒、測試片、血清、空白平皿、實驗室耗材等。公司致力于為食品、醫(yī)藥、化妝品、科研機構(gòu)、學(xué)校、醫(yī)院、水質(zhì)檢測機構(gòu)等提供實驗室配套服務(wù),我們將本著誠信為本、質(zhì)量為先的原則,為廣大新老客戶提供最卓越的品質(zhì)和最周到的服務(wù)。公司名稱:青島惟思生物科技有限公司公司地址:青島經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)電話:0532-68976625/18562732709聯(lián)系人:王經(jīng)理 QQ 公司郵箱:@sina.com
荷蘭ceditest 瑞士Prionics 華南總代理 廣州市瑞品生物技術(shù)有限公司
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瑞士Prionics牛布病布氏桿菌毒病抗體檢測試劑盒
簡介一些年來,荷蘭動物科學(xué)與健康研究所已經(jīng)建立了控制和消除動物疾病的專門技術(shù)和知識體系。依靠對病因病理的基礎(chǔ)性研究,該組織為全球?qū)iT的實驗室和獸醫(yī)服務(wù)機構(gòu)提供了病毒學(xué)、細菌學(xué)、寄生蟲學(xué)和免疫學(xué)科研工具。布氏菌病在世界各地均有發(fā)生,是一種人畜共患病,病原為布氏桿菌(革蘭氏陰性菌),這類細菌包含6種:牛B流產(chǎn)型,羊B.melitensis (3 biovars), 豬B. suis (5 biovars), B. ovis, 狗B. canis, B. neotomae and B. maris. 牛是B流產(chǎn)型主要的宿主,,綿羊和山羊是B. melitensis的主要宿主。原則上講,布氏桿菌不同亞型感染動物,臨場癥狀有可比性,且都是繁殖障礙。例如,母畜的流產(chǎn)和不孕公畜的睪丸炎和附睪炎。人類感染布氏桿菌的癥狀是波浪熱,這對農(nóng)民、實驗室工作人員和屠宰工作人員來說是相當(dāng)危險的。特別是B. melitensis對人類有高度的致病性,是世界上人畜共患病最嚴重的病原之一。被污染的山羊奶酪已經(jīng)被頻繁的報道說是感染原,F(xiàn)在已經(jīng)發(fā)展了一些檢測布氏桿菌的血清學(xué)方法,膠合測試,補體反應(yīng)和ELISA’s是應(yīng)用比較廣泛的確認方法。所有檢測抗體都是針對滑型LPS O鏈的。無論使用那種檢測方法,都應(yīng)該與注意革蘭氏陽性菌的交叉反應(yīng),如Francisella tularensis, Campylobacter, Salmonella,Pasteurella, Yersinia enterocolitica 0:9, Escherichia coli O:117 and 0:156 。感染B流產(chǎn)型和B. melitensis后,會出現(xiàn)IgM抗體,緊跟著會出現(xiàn)IgG抗體(IgG1和IgG2)。本試劑盒就是檢測血清和牛奶中的IgG1抗體,且是一個經(jīng)過Bercovich etal(1990)修正的檢測試劑盒,也符合歐盟64/432的指示標準。試劑盒有所有檢測是需要的試劑,可以檢測440個樣品或者220個重復(fù)的血清樣品。
參考文獻(1) Bercovich, Z. and Taaijke, R. (1990) EnzymeImmunoassay using monoclonal antibodies for the detection of Brucella abortusantibodies in cow milk. J. Vet. Med. B 37, 735-759.(2) OIE Manual of standards for Diagnostics Test andVaccines, Fourth Edition, 2000.
應(yīng)用本試劑盒是檢測牛、山羊、綿羊血清和牛奶樣品中布氏桿菌的有效手段。是動物健康免疫程序中檢測個體羊或牛布什桿菌抗體的決定性步驟。本試劑盒用來監(jiān)督、確認整個群體是否有布什桿菌病的發(fā)生。
檢測原理本試劑盒是用間接ELISA檢測感染牛、綿羊、山羊的布氏桿菌抗體。用超聲波降解的非活性的布氏桿菌抗原包被酶標板,加血清和牛奶樣品。測試樣品中存在流產(chǎn)型和melitensis抗體,孵化后就會和抗原反應(yīng)。加帶有HRP的抗Ig的單克隆抗體酶標結(jié)合物,就會和抗原抗體結(jié)合物中的抗體反應(yīng)。之后,加底物,如果檢測樣品中有特異性抗體出現(xiàn),就會有顏色反應(yīng)。每板中應(yīng)使用3個對照血清樣品,分別為陽性、陰性、和一個弱陽性。這三個血清對照已經(jīng)根據(jù)OIE規(guī)定的ELISA國際標準校對過了。樣品的OD值應(yīng)該減去空白的OD值,對比1是檢測中最大的OD值,對比2應(yīng)該是陰性的,pp<20%,對比3為弱陽性的,pp值應(yīng)該20-45%。
一般評述如果沒有前面的注意事項,此說明書的一些內(nèi)容很容易變化。但是此試劑盒自從公布之日起一直都是完整而精確的,所以對使用以上操作方法產(chǎn)生的結(jié)果負責(zé)。
試劑盒成分1) 酶標板5塊 5 testplates 2) 濃縮酶標記物,1瓶 conjugate(concentrated) 3) 陽性對照血清,1瓶 1 vial reference serum1(positive) 4) 陰性對照血清,1瓶 1 vial reference serum2(negative) 5) 弱陽性對照血清,1瓶1 vial reference serum(weak positive) 6) 濃縮稀釋緩沖液,1瓶 1 vial dilution buffer(concentrated) 7) 底物液,1瓶(直接使用)1 vial chromogen /substrate (ready to use) 8) 濃縮洗液,1瓶 1 vial washing fluid (concentrated) 9) 終止液,1瓶(直接使用)1 vial stop solution(ready to use) 10) 10個封口膜10 platesealers
人甲肝病毒IgG抗體(HAVIgG)ELISA檢測試劑盒上海潤裕生物科技有限公司等科研產(chǎn)品,我公司ELISA試劑盒和免疫組化試劑盒產(chǎn)品質(zhì)量可靠,ELISA試劑盒(酶聯(lián)免疫分析試劑盒)專業(yè)技術(shù)團隊提供免費代測服務(wù)及售后指導(dǎo)。所以生物試劑產(chǎn)品用于科研實驗領(lǐng)域,如有需要請直接來電或給我們留言(半個工作日內(nèi)給您回復(fù))。
歡迎來電索取產(chǎn)品報價,產(chǎn)品說明書,潤裕生物品質(zhì)服務(wù),真誠相伴!
主要成分:酶標板,試劑,標準品等
性狀:盒裝液體
ELISA試劑盒實驗標本:血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
ELISA試劑盒種屬齊全:人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。
產(chǎn)品運輸方面:部分現(xiàn)貨供應(yīng),一般為快遞運輸,江浙滬隔天到,外地及偏遠地方三至五天時間到貨
2、檢測原理:采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。
3、服務(wù)承諾:工作時間內(nèi)免費技術(shù)咨詢和指導(dǎo),提供來樣檢測及免費代測服務(wù),保證實驗結(jié)果的有效性。
4、研究領(lǐng)域:炎癥研究、神經(jīng)生物學(xué)、腫瘤研究、新陳代謝、信號通路、免疫學(xué)、傳染病、其他研究。
如果人甲肝病毒IgG抗體(HAVIgG)ELISA檢測試劑盒所檢測的樣本不是連續(xù)的,所以實驗中不用的板條立即放回包裝中,密閉封口,4℃可保存1個 月。其余不用試劑應(yīng)包裝好或蓋好。在做樣本檢測前要有一個完整的計劃,如標本編號、所測項目、目的等。操作時盡量使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
主要分為以下系列:
1、細胞因子檢測試劑盒
2、內(nèi)分泌檢測試劑盒
3、肝纖維化檢測試劑盒
4、心肌梗塞檢測試劑盒
5、腫瘤標志物檢測試劑盒
6、自身免疫檢測試劑盒
7、優(yōu)生優(yōu)育檢測試劑盒
8、傳染病檢測試劑盒等等。
人甲肝病毒IgG抗體(HAVIgG)ELISA檢測試劑盒操作步驟
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法:
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,最后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
人甲肝病毒IgG抗體(HAVIgG)ELISA檢測試劑盒注意事項
1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在人甲肝病毒IgG抗體(HAVIgG)ELISA檢測試劑盒實驗中,選擇好各項ELISA實驗條件是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的最適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。
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