iCAP 7000 Plus系列ICP-OES 簡化了工作流程,并實現(xiàn)了快速、低成本、痕量元素分析。Qtegra ISDS從樣品導(dǎo)入到生成報告和數(shù)據(jù)處理,為用戶量身定制工作流程。預(yù)優(yōu)化方法簡化甚至省去新方法建立過程。強大的方法開發(fā)工具意味著新用戶可以體驗方便、可靠的方法開發(fā),即便采用先進的配件,如激光燒蝕。兼容性硬件進樣裝置可快捷替換,氣路自動連接。簡單的日常維護采用專門的進樣系統(tǒng)和獨特的增強型耐基質(zhì)(EMT) 等離子體炬管設(shè)計。
iCAP 7000 Plus系列ICP-OES可以實現(xiàn)元素周期表中70多種元素的定性及精確定量分析,一次進樣就可以實現(xiàn)所有元素的測定,該產(chǎn)品在目前世界上同類產(chǎn)品中體積最小,分析速度最快。
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中文名稱:大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒英文名稱: Rat PICP ELISA KIT
購買我公司任一款elisa試劑盒,均可享受免費代測服務(wù)。
大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒 實驗材料與試劑配制:1.儀器與材料:酶標(biāo)儀(使用前預(yù)熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。2.緩沖液使用:加5ul的緩沖液于50ul的樣品中,如果樣品量不夠或者不確定,緩沖液和樣品的混合比例不要小于1:10即可。 混勻,靜置1小時備用(如果標(biāo)本是血清或者血漿,此步驟忽略)。3.洗液的配制:按1:100的比例配制洗液備用。大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒樣品收集、處理及保存1.細胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。2.細胞:用PBS反復(fù)洗滌細胞3次,調(diào)整細胞濃度達到104-106/ml 左右,通過反復(fù)凍融,使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。3.血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。|4.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上 清。5.體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。6.組織標(biāo)本:切取組織標(biāo)本,稱取重量0.5mg,加入500ul的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。7.樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。8.保存:如果樣品不能立即檢測,應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒 操作步驟:1.取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置 30分鐘。2.分組:取出 96孔板,根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 品組(6個濃度)、空白孔、待測樣品組。注:為減少實驗誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。3.加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 100ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入 100ul的蒸餾水;其余微孔中加入100ul的待測樣本。4.加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入 50ul的酶標(biāo)溶液(空白對照孔除外)。5.溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育1小時。6.洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標(biāo)板 5次,用吸水紙徹底拍干。7.顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。8.終止:25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,加入50ul終止液。9.讀板:在450nm波長讀取各孔的OD 值。 注:讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時間控制在終止反應(yīng)后的 30分鐘內(nèi),以免影響準(zhǔn)確性。大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒 注意事項:1.實驗操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。2.加樣:加樣時,要控制加樣速度,避免第一孔與最后一孔間的時間間隔過大,否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間,從而影響實驗的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。3.孵育:嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行。4.反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化,如果顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。5.建議實驗前預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高,應(yīng)對樣品進行稀釋,計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。6.建議使用本試劑盒時先做預(yù)實驗(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,試用幾個標(biāo)本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經(jīng)銷商聯(lián)系,如果因運輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒 安全性1. 避免人體直接接觸顯色劑A、B和終止液。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。2. 實驗中不要進食、抽煙或使用化妝品。3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒 保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃2.有效期:6個月
大鼠一型C端前膠原( PICP)elisa試劑盒 采購
中文名稱:大鼠一型C端前膠原( PICP)ELISA Kit
英文名稱:Rat PICP ELISA Kit
規(guī)格:96T/48T
保存條件:2-8℃
有效期:6個月
產(chǎn)地:國產(chǎn)/進口
大鼠一型C端前膠原( PICP)ELISA Kit 用途:
用于定量檢測血清、血漿及相關(guān)液體樣本中大鼠一型C端前膠原( PICP)的含量。僅供科學(xué)研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗。
大鼠一型C端前膠原( PICP)ELISA Kit 注意事項:
①試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
②濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
③各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
④請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
⑤封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
⑥底物請避光保存。
⑦嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
⑧所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
⑨本試劑不同批號組分不得混用。
⑩如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
大鼠一型C端前膠原( PICP)ELISA Kit 相關(guān)產(chǎn)品:
雞轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1) Chicken Transforming Growth factor β1,TGF-β1
駱駝脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2) Camel lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PL-A2
馬主要組織相容性復(fù)合體(MHC/ELA) Equine major histocompatibility complex,MHC/ELA
人白介素18(IL-18) Human Interleukin 18,IL-18
雞血小板因子4(PF-4/CXCL4) Chicken Platelet Factor 4,PF-4
猴β2微球蛋白(BMG/β2-MG) Monkey β2-microglobulin,BMG/β2-MG
雞層連蛋白/板層素(LN) Chicken Laminin,LN
鴨抗凝血素抗體(aPT1/aPT2) Duck anti-prothrombins antibodies,aPT1/aPT2
綿羊胰島素樣生長因子1(IGF-1) Sheep Insulin-Like Growth Factor-I,IGF-I
人血管內(nèi)皮細胞生長因子D(VEGF-D)Human Vascular Endothelial cell Growth Factor D,VEGF-D
雞白血病病毒抗原(ALV-AG) Chicken Avian Leukosis Virus AG,ALV-AG
猴子巨噬細胞移動抑制因子(MIF) Monkey Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF
人單核細胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8) Human monocyte chemotactic protein 2,MCP-2
人肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶(PPI) Human Peptidyl prolyl cis/trans isomerase,PPI
人多巴胺-β羥化酶(DBH) Human dopamine-β-hydroxylase,DBH
小鼠過敏毒素/補體片斷4a(C4a) Mouse Complement fragment 4a,C4a
小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB Mouse Glycogen phosphorylase BB,GP-BB
小鼠血紅素氧合酶2(HO-2) Mouse heme oxygenase 2,HO-2
小鼠抗IgE受體抗體 Mouse anti-IgE receptor antibody
小鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199 Mouse Gastrointestinalcancer Marker-CA199
全國咨詢熱線:010-56429247 13488645491 QQ:774226171 聯(lián)系人:梁經(jīng)理
大鼠一型C端前膠原( PICP)ELISA檢測試劑盒價格 Rat PICP ELISA KIT 北京方程生物 elisa實驗代測
Elisa實驗 自備物品:1. 37 ℃ 恒溫箱2. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀3. 精密移液器及一次性吸頭4. 蒸餾水5. 一次性試管6. 吸水紙
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大鼠一型C端前膠原( PICP)ELISA檢測試劑盒價格 Rat PICP ELISA KIT 北京方程生物 elisa實驗代測
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ICP 蠕動泵管 參數(shù):
Metric I.D. Wall mm Description Colour Code 0.13mm 0.91 Orange/Black 0.19mm 0.91 Orange/Red 0.25mm 0.91 Orange/Blue 0.28mm 0.91 White/Blue 0.31mm 0.91 Red/Blue 0.33mm 0.91 Brown/Blue 0.36mm 0.91 Brown/Black 0.38mm 0.91 Orange/Green 0.44mm 0.91 Green/Yellow 0.51mm 0.91 Orange/Yellow 0.57mm 0.91 White/Yellow 0.64mm 0.91 Orange/White 0.76mm 0.86 Black/Black 0.89mm 0.86 Orange/Orange 0.95mm 0.86 White/Black 1.02mm 0.86 White/White 1.09mm 0.86 White/Red 1.14mm 0.86 Red/Red 1.22mm 0.86 Red/Grey 1.30mm 0.86 Grey/Grey 1.42mm 0.86 Yellow/Yellow 1.52mm 0.86 Yellow/Blue 1.65mm 0.86 Blue/Blue 1.75mm 0.86 Blue/Green 1.85mm 0.86 Green/Green 2.06mm 0.86 Purple/Purple 2.29mm 0.86 Purple/Black 2.54mm 0.86 Purple/Orange 2.79mm 0.86 Purple/White 3.18mm 0.86 Black/White
PVC 、Silicone 、Solva® Tubes 、Viton® Tubes 、TYGON R-3603適用于蠕動泵泵管和各種理化儀器設(shè)備連接,具有良好的氣體輸送和排水管道功能。
小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)酶聯(lián)免疫試劑盒價格
l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)的含量。
l 有效期:6個月
l 保存條件:2-8℃
l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注:標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。
標(biāo)本處理
1. 本公司只對試劑盒本身負責(zé),不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責(zé),請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。
2. 實驗前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量,如果標(biāo)本濃度過高,應(yīng)對標(biāo)本進行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。
3. 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進行預(yù)實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。
4. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差。
5. 若樣本為細胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。
6. 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。
7. 建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏差。
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標(biāo)儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 8孔×12條 | 8孔×6條 | 無 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
備注:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:16、8、4、2、1、0 ng/mL
2. 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗,標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,可用樣本稀釋液將標(biāo)本進行適當(dāng)稀釋后再進行實驗。
注意事項
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準(zhǔn)備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
實驗結(jié)果計算
以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。
試劑盒性能
1. 檢測范圍:0.5 ng/mL – 16 ng/mL。
2. 靈敏度:最低檢測濃度小于0.1 ng/mL。
3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。
說明
1. 由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。
2. 最終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。
3. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。
4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結(jié)果。
問題解答
若實驗效果不好,請及時對顯色結(jié)果拍照,保留所用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料:
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
標(biāo)準(zhǔn)曲線差 | 吸取及洗滌不充分 | 充分的吸取及洗滌 |
移液不精確 | 檢查和校正移液器 | |
精密度低 | 洗滌不充分 | 按說明書要求充分洗滌和浸泡 |
混勻不充分和吸取試劑不足 | 充分混勻和吸取試劑 | |
重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜 | 使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜 | |
加樣不精確 | 檢查和校正移液器 | |
O.D值低 | 每孔加的試劑量不精確 | 校正移液器,精確加入試劑 |
溫育時間不正確 | 保證充足的溫育時間 | |
溫育溫度不正確 | 試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度 | |
酶標(biāo)記物或底物失效 | 通過混合酶標(biāo)記物和底物,顏色應(yīng)迅速顯現(xiàn)來檢查 | |
沒有加入終止液 | 按照說明書實驗操作步驟加入終止液 | |
超出讀數(shù)時間讀數(shù) | 在說明書推薦的讀數(shù)時間內(nèi)讀數(shù) | |
樣本值 | 不正確的樣本儲存方式 | 正確儲存樣本,使用新鮮樣本進行實驗 |
不正確的樣本收集和處理方法 | 采取正確的樣本收集和處理方法 | |
待測物質(zhì)在樣本中含量低 | 使用新鮮樣本,重復(fù)實驗 |
小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)ELISA試劑盒
l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)的含量。
l 有效期:6個月
l 保存條件:2-8℃
l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注:標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。
標(biāo)本處理
1. 本公司只對試劑盒本身負責(zé),不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責(zé),請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。
2. 實驗前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量,如果標(biāo)本濃度過高,應(yīng)對標(biāo)本進行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。
3. 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進行預(yù)實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。
4. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差。
5. 若樣本為細胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。
6. 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。
7. 建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏差。
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標(biāo)儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 8孔×12條 | 8孔×6條 | 無 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
備注:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度:詳情來電咨詢
2. 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗,標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,可用樣本稀釋液將標(biāo)本進行適當(dāng)稀釋后再進行實驗。
注意事項
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準(zhǔn)備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作流程
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
實驗結(jié)果計算
以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。
說明
1. 由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。
2. 最終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。
3. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。
4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結(jié)果。
常見問題
若實驗效果不好,請及時對顯色結(jié)果拍照,保留所用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料:
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
標(biāo)準(zhǔn)曲線差 | 吸取及洗滌不充分 | 充分的吸取及洗滌 |
移液不精確 | 檢查和校正移液器 | |
精密度低 | 洗滌不充分 | 按說明書要求充分洗滌和浸泡 |
混勻不充分和吸取試劑不足 | 充分混勻和吸取試劑 | |
重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜 | 使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜 | |
加樣不精確 | 檢查和校正移液器 | |
O.D值低 | 每孔加的試劑量不精確 | 校正移液器,精確加入試劑 |
溫育時間不正確 | 保證充足的溫育時間 | |
溫育溫度不正確 | 試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度 | |
酶標(biāo)記物或底物失效 | 通過混合酶標(biāo)記物和底物,顏色應(yīng)迅速顯現(xiàn)來檢查 | |
沒有加入終止液 | 按照說明書實驗操作步驟加入終止液 | |
超出讀數(shù)時間讀數(shù) | 在說明書推薦的讀數(shù)時間內(nèi)讀數(shù) | |
樣本值 | 不正確的樣本儲存方式 | 正確儲存樣本,使用新鮮樣本進行實驗 |
不正確的樣本收集和處理方法 | 采取正確的樣本收集和處理方法 | |
待測物質(zhì)在樣本中含量低 | 使用新鮮樣本,重復(fù)實驗 |
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