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我準(zhǔn)備按照你提供的基本程序嘗試一次。免RNA提取FFPE RT-PCR試劑盒還需要問的問題是：
1.洗滌包含體，實際上就是洗滌細胞裂解液離心后的沉淀，對嗎？我將沉淀-20度保存，應(yīng)該沒有什么影響吧？另外，我看到有的包含體洗滌液配方中含有PMSF，是蛋白酶抑制劑，它是否對目的蛋白有影響呢？
2.尿素洗滌包含體，洗滌上清和沉淀分別進行SDS-PAGE，得到一個收率和純度最佳的尿素濃度。免RNA提取FFPE RT-PCR試劑盒洗滌上清和沉淀是指用尿素洗滌細胞裂解沉淀的嗎？但不溶的沉淀能跑SDS-PAGE嗎？這個收率和純度是指洗滌后溶液里面浸出的目的蛋白嗎？
3.我表達的目的蛋白是分解底物釋放無機磷酸鹽的一種水解酶，不適合用含有磷酸鹽的PBS溶液來洗滌和緩沖，而是用Tris-HCl來洗滌和緩沖的。那我用Tris-HCl來配8M尿素，對復(fù)性有影響嗎？
不知道你能否提供相應(yīng)的參考文獻或者書目給我，我再仔細看看。
免RNA提取FFPE RT-PCR試劑盒技術(shù)回答：
1）包含體在-20度或-70度保存較好，包含體狀態(tài)的蛋白穩(wěn)定性好，一但復(fù)性成功，溶液狀態(tài)的蛋白容易被降解。PMSF，是蛋白酶抑制劑，應(yīng)該對目的蛋白影響不大。我原來做實驗時一般不加PMSF，加與不加看你的蛋白的穩(wěn)定性。
2）洗滌上清和沉淀是指用尿素洗滌細胞裂解產(chǎn)物離心后的沉淀，用tip挑一點沉淀后用1倍的loading buffer重懸，與其他樣品一起煮后電泳。從洗滌上清和沉淀的電泳情況可以看出目的蛋白的損失情況和雜蛋白的去除情況，免RNA提取FFPE RT-PCR試劑盒選擇一個合適的洗滌條件有時對純化和得率很重要。
3）用Tris配尿素，OK!
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第六章 “克必隆”克隆及表達系列
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Feb-10克必隆G載體 2ug
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AM1005一步法熒光定量RT-PCR試劑盒 AM1005-Ambion AM1005 AgPath-ID 品 牌： ABI Ambion Life Technologies 型 號： AM1005 規(guī) 格： 100次 單 價： 面議 起 訂： 1 盒
特點：
1）高靈敏，高特異的穩(wěn)定的RNA病源RT-PCR檢測試劑盒
2）簡便快速，1小時內(nèi)可以獲得檢測結(jié)果
3）組分很少，反應(yīng)組裝方便
AgPath-ID? 一步法RT-PCR試劑盒利用一種快速單管實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR方法，可靈敏穩(wěn)定地擴增RNA靶點。
? 推薦用于RNA病原體擴增
? 一致的RNA靶位擴增，高特異性，高靈敏度
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? 含有ROX，可用于定量熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)化
AgPath-ID? AgPath-ID? 一步法 RT-PCR試劑配置用于快速簡單地設(shè)置反應(yīng)。所有反應(yīng)集于一管，最大程度降低樣本處理錯誤，縮短設(shè)置時間。組裝好之后，約1小時內(nèi)即可獲得結(jié)果。試劑盒中的RT-PCR酶混合液組分有高效的 ArrayScript? 逆轉(zhuǎn)錄酶、可提供高產(chǎn)量cDNA的突變MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶和用于特異性靶點擴增的熱啟動DNA聚合酶—AmpliTaq Gold? 聚合酶。2X RT-PCR緩沖液包含有優(yōu)化的試劑，用于高效穩(wěn)定地進行的逆轉(zhuǎn)錄和PCR；緩沖液中還含有專利參比熒光ROX，用于定量熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)化。該試劑盒還提供了可選的檢測增強劑，可擴增具有富GC區(qū)或頑固二級結(jié)構(gòu)的模板。
英文名稱：RT-PCRCAS:產(chǎn)品規(guī)格：存儲方式：應(yīng)貯存于通風(fēng)干燥環(huán)境中，密封瓶蓋，防止受潮。嚴(yán)禁與酸類、易燃物、還原劑等儲存。通用RT-PCR試劑盒等試劑產(chǎn)品的使用注意事項：（1）、所有試劑、溶液以及樣品的包裝上必須要有標(biāo)簽。標(biāo)簽要完整、清晰，表明試劑的名稱、規(guī)格、質(zhì)量。（2）、溶液除了表明品名外，還應(yīng)表明濃度、配置日期等。萬一標(biāo)簽脫落，應(yīng)照原樣貼牢。決定不允許在容器內(nèi)裝入與標(biāo)簽不相符的物品。（3）、無標(biāo)簽的試劑必須取小樣檢定后才可使用。不能使用的化學(xué)試劑要慎重處理，不能隨意亂倒。為了保證試劑不受污染，應(yīng)當(dāng)用清潔的牛角勺或不銹鋼小勺從試劑瓶中取出試劑，絕不可以用手抓取。若試劑結(jié)塊，可用潔凈的玻璃棒或瓷藥鏟將其搗碎后取出。（4）液體試劑可用洗干凈的量筒到取，不要用吸管伸入原試劑中吸取液體。從試劑瓶中取出的、沒有用完的聲譽藥品，不可再倒回原瓶。通用RT-PCR試劑盒等試劑產(chǎn)品種類齊全，質(zhì)量可靠。春季促銷，相關(guān)優(yōu)惠熱銷產(chǎn)品如下:
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XY-(SJ)-00306D-(+)-Melibiose Monohydrate 蜜二糖水合物CAS：585-99-9規(guī)格:10g
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XY-(SJ)-00308Celestine blue B 天青石藍CAS：1562-90-9規(guī)格:1g
XY-(SJ)-00309Celestine blue B 天青石藍CAS：1562-90-9規(guī)格:5g
XY-(SJ)-00310K-Carrageenan Karra Type k-卡拉膠CAS：11114-20-8規(guī)格:25g
XY-(SJ)-00311K-Carrageenan Karra Type k-卡拉膠CAS：11114-20-8規(guī)格:100g
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XY-(SJ)-00313SYBR Green Realtime PCR Master Mix 規(guī)格:1ml×5
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XY-(SJ)-00320D-葡萄糖酸鈉CAS：527-07-1規(guī)格:100g
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XY-(SJ)-00322聚乙二醇10000CAS：25322-68-3規(guī)格:250g
XY-(SJ)-00323Sodium malonate monohydrate丙二酸鈉一水合物CAS：26522-85-0規(guī)格:500g
XY-(SJ)-00324硅藻土CAS：61790-53-2規(guī)格:1000g
XY-(SJ)-00325鈉型732陽離子交換樹脂CAS：規(guī)格:500g
XY-(SJ)-00326無水氯化鈣CAS：10043-52-4規(guī)格:500g
XY-(SJ)-00327氯化717陰離子交換樹脂CAS：規(guī)格:500g
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XY-(SJ)-00329L（+）-酒石酸CAS：87-69-4規(guī)格:500g
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