"漆酶英文名:Laccase from Rhus vernificera規(guī)格:BR,0.5u/mgCAS號(hào):80498-15-3包裝:1克價(jià)格:1120別名:漆酶其他包裝:1克;100毫克"
人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒 現(xiàn)貨供應(yīng),一般為快遞運(yùn)輸,江浙滬隔天到,外地及偏遠(yuǎn)地方三至五天時(shí)間到貨
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人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒注意事項(xiàng):1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
樣本收集與前期準(zhǔn)備 利用ELISA進(jìn)行臨床檢驗(yàn)常見的樣本一般包括血液(指血,靜脈血),尿,糞便,腦脊液,胸腹水,前列腺液,精液,陰道分泌物等,這些樣本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求。(一) 臨床樣本的收集A、血液樣本 有些生理因素,如吸煙、進(jìn)食、運(yùn)動(dòng)、情緒波動(dòng)、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化,有些甚至還有晝夜變化。因此血液標(biāo)本的采集應(yīng)盡量避免生理因素干擾,以條件一致為宜,如無法避免,應(yīng)在標(biāo)本上注明該因素。1.外周血 一般選取左手無名指內(nèi)側(cè)采血,該部位應(yīng)無凍瘡,炎癥,水腫,破損。如該部位不符合要求,以其他手指部位代替。對(duì)燒傷病人,可選擇皮膚完整處采血。由于部分血液常規(guī)檢測(cè)(如白細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類等)受生理因素影響波動(dòng)過大,比較時(shí)宜使條件盡量一致。涉及到體內(nèi)出、凝血功能的檢測(cè)項(xiàng)目(如血小板計(jì)數(shù),出血時(shí)間或凝血時(shí)間等)的檢測(cè),一定要注意了解患者是否用過抗凝、促凝藥物,以便在減少或避免干擾因素的影響。2.靜脈血 除涉及各種止血和血栓檢測(cè)等項(xiàng)目需采用抗凝靜脈血血漿外,目前絕大多數(shù)檢測(cè)項(xiàng)目的分析檢測(cè)可直接采用靜脈血的血清。在血清檢測(cè)項(xiàng)目中,有些(如血糖,血脂等)受飲食及晝夜因素影響較大,一般以清晨空腹血標(biāo)本為宜;有些在血中衰變較快(血清酶活性測(cè)定如ACP活性等),0~4℃貯存活性減弱也不一,這些項(xiàng)目的檢測(cè)必須及時(shí)而快速;有些(如肌酸激酶等)受運(yùn)動(dòng)等因素影響較大。抽血時(shí)避免溶血的發(fā)生也十分重要,尤其涉及血鉀,LDH等的測(cè)定。B、尿液樣本 同血標(biāo)本一樣,尿液標(biāo)本受飲食、運(yùn)動(dòng)、藥物量等因素的影響也較大,特別是飲食的影響,故一般來說晨尿優(yōu)于隨機(jī)尿。晨尿是指清晨起床后的次尿標(biāo)本,較濃縮和酸化,有形成分(如血細(xì)胞,上皮細(xì)胞,管形)相對(duì)集中便于觀察。隨機(jī)尿即隨意一次尿,留取方便,但受飲食、運(yùn)動(dòng)、藥物影響較甚,易于出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果,如飲食性蛋白尿,飲食性糖尿,維生素C干擾潛血結(jié)果等。餐后尿(午餐后2小時(shí)收集的患者尿液)適用于尿糖,尿蛋白和尿膽原的檢查,此時(shí)的尿標(biāo)本可增加試驗(yàn)敏感性,檢出較輕微的病變。12小時(shí)尿細(xì)胞計(jì)數(shù)即Addis計(jì)數(shù)(前晚8時(shí)排空膀胱后留取至次日晨8時(shí)的所有尿液),因時(shí)間較長(zhǎng),細(xì)菌易繁殖,須加入防腐劑甲醛。24小時(shí)尿(天晨8時(shí)排空膀胱后留取至次日晨8時(shí)的所有尿液)中化學(xué)物質(zhì)的定量,包括蛋白,糖,尿17-酮、17-羥類固醇,兒茶酚胺,Ca2+等,檢測(cè)不同的物質(zhì),選擇不同的防腐劑防腐。清潔中段尿多用于尿細(xì)菌培養(yǎng),要求無菌,沖洗外陰后留取標(biāo)本。所有尿標(biāo)本的收集都應(yīng)足量,最少12 ml,50 ml,定時(shí)尿須全部收集,對(duì)女性患者應(yīng)避免陰道分泌物、經(jīng)血污染尿標(biāo)本。C、糞便樣本 糞便標(biāo)本的檢測(cè)對(duì)判斷消化系統(tǒng)疾病有重要參考價(jià)值。采集時(shí)要求用干凈的竹簽選取含有粘液、膿血等異常病變成分的糞便,對(duì)外觀無異常的糞便須從表面、深處及糞端多處取材。找寄生蟲蟲體及作蟲卵計(jì)數(shù)應(yīng)收集24小時(shí)糞便。查痢疾阿米巴滋養(yǎng)體應(yīng)于排便后立即檢查,從有膿血和稀軟處取材,保溫送檢。查日本血吸蟲蟲卵時(shí)應(yīng)取粘液、膿血部分,孵化毛蚴時(shí)至少留取30g糞便,且需盡快處理。檢查蟯蟲卵須用透明薄膜拭子于晚12時(shí)或清晨排便前自肛門周圍皺襞處拭取并立即鏡檢。隱血試驗(yàn)(化學(xué)法),試驗(yàn)前3日禁食肉類及含動(dòng)物血食物并禁服鐵劑,維生素C等。所有糞便標(biāo)本采集后1小時(shí)內(nèi)應(yīng)檢查完畢,以防止有形成分受消化酶及pH的破壞,來不及檢測(cè)的,應(yīng)及時(shí)用PBS進(jìn)行緩沖處理,離心去上清保存。D、腦脊液樣本 腦脊液標(biāo)本采集后立即送檢,放置過久將影響檢驗(yàn)結(jié)果:如細(xì)胞變性,破壞,導(dǎo)致計(jì)數(shù)和分類不準(zhǔn);有些化學(xué)物質(zhì)如葡萄糖等將分解含量減少;細(xì)菌發(fā)生自溶影響細(xì)菌的檢出率。腦脊液抽取后一般分裝三個(gè)無菌管,管作細(xì)菌培養(yǎng),第二管作化學(xué)分析和免疫學(xué)檢查,第三管作一般性狀及顯微鏡檢查,三管的順序不宜顛倒。因標(biāo)本采集較難,全部送檢和檢測(cè)過程應(yīng)注意安全。E、胸腹水樣本 與腦脊液標(biāo)本一樣,采集后的標(biāo)本注意安全,及時(shí)送檢。一般也分裝三管,一管作常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查,一管生化檢查,一管細(xì)菌培養(yǎng),順序以與腦脊液相同為宜。F、前列腺液樣本 前列腺液標(biāo)本由前列腺按摩后采集,液量少時(shí)直接滴在載玻片上及時(shí)送檢,須注意防止標(biāo)本蒸干,量多時(shí)收集在潔凈干燥的試管中。若按摩不出前列腺液,可檢查按摩后的尿液沉渣。G、精液樣本 精液標(biāo)本采集前應(yīng)禁欲3~7天,排凈尿液后可用手淫法或其他方法將精液直接排入干凈的容器中,保溫并及時(shí)送檢。由于精子生成日間變動(dòng)較大,一般應(yīng)檢查2~3次(每次間隔1~2周)方可做診斷。H、陰道分泌物樣本 陰道標(biāo)本采集前24小時(shí)應(yīng)禁止房事、盆浴、陰道檢查、陰道灌洗及局部上藥等,取材所用器械需清潔。一般用鹽水浸濕的棉拭子自陰道深部或陰道穹后部、宮頸管口等處取材,制成生理鹽水涂片后觀察陰道分泌物標(biāo)本,經(jīng)期的女性患者不宜檢查陰道分泌物標(biāo)本。
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Elisa試劑盒性能1. 靈敏度:最小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2. 特異性:不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%
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CAS:85386-98-7,1-(3-碘-2-吡啶基)哌嗪,規(guī)格:1gCAS:86873-60-1價(jià)格,5-氯吡啶-2-羧酸價(jià)格,1gCAS:7758-87-4,磷酸三鈣/β-三磷酸鈣/磷酸鈣/三堿式磷酸鈣/原磷酸鈣/脫磷酸鈣/Calcigenol simple,LR,250克,RT環(huán)十五(碳)烯氧化物價(jià)格,5gCAS:119692-4價(jià)格,2-Methoxy-6-(trifluoromethyl)benzoic acid價(jià)格,CAS:220405-40-3,2,2-二氟-1,3-二甲基-咪唑烷,英文名稱:2,2-Difluoro-1,3-dimethylimidazolidine編號(hào):bs-2417R,細(xì)胞毒性受體NK-p46抗體,Anti-CD335/NKp46/NCR1,規(guī)格:0.1ml/0.2ml,編號(hào):bs-1162R,生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因β/黑素瘤生激因子抗體,Anti-GROβ(growth regulatedoncogeneβ),規(guī)格:0.1ml/0.2ml,[1,1'-Bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium(II價(jià)格,氘代重水10*1ml,99.9%,CAS:14109-72-9價(jià)格,1-甲基硫代-2-價(jià)格,5gEPA505有機(jī)農(nóng)藥-Mix1,標(biāo)準(zhǔn)品,EPA505Mix1,CAS:352525-98-5,6-乙氧基-2-萘硼酸,英文名稱:6-Ethoxy-2-naphthaleneboronicacid3-Chloro-5-fluoro-4-methoxyphenylacetic acid價(jià)格,2CAS:7439-92-1價(jià)格,鉛價(jià)格,15x15cm甲肝抗體(IgG)*,方法:CB(進(jìn)口原料),標(biāo)準(zhǔn)范圍:,標(biāo)準(zhǔn)范圍:定性,反應(yīng)溫度及時(shí)間:45℃2小時(shí) ,加樣量:10μl,RTh聚乙烯亞胺價(jià)格,10mlCAS:1641-61-8,環(huán)己基磷酸二甲酯,規(guī)格:10gCAS:79950-65-5,N-Boc-N'-芐氧甲基-L-組氨酸,英文名稱:N-Boc-N'-benzyloxymethyl-L-histidineCAS:350988-62-4價(jià)格,3-鄰-基-1H-吡唑-4-甲醛價(jià)格,1gCAS:6362-63-6,3-氰基-3-苯基酸乙酯,純度:97%,規(guī)格:5g2357-52-0|4-溴-2-氟苯甲醚,產(chǎn)品名稱:4-溴-2-氟苯甲醚CasNo:2357-52-0分子式:C7H6BrFO分子量:20503含量:98%CAS:138-52-3,D(-)-水楊苷,英文名稱:D(-)-SalicinCAS:685-83-6,雙(二乙基氨基)氯膦,純度:94%,規(guī)格:5g槐角苷CAS:152-95-4,Sophoricoside,升血糖作用;槐角浸羔注射于家兔,能使血糖一時(shí)性增高。據(jù)南京藥物研究所報(bào)道,從槐角中提出的染料木素和山柰酚,具有干擾孕卵運(yùn)輸、終止孕卵著床和抗早期 兔白介素17說明書(IL-17)Elisa檢測(cè)試劑盒價(jià)格CAS:1413038價(jià)格,1,4-雙(1-羥基環(huán)己基)-1,3-丁二炔價(jià)格,5gCAS:1302-93-8,硅酸鋁,英文名稱:Aluminumsilicate兔子S100B蛋白 S-100B價(jià)格Elisa試劑盒現(xiàn)貨,rabbit Soluble protein-100B,S-100B ELISA試劑盒,96T/48T88-60-8|6-叔丁基間甲酚,產(chǎn)品名稱:6-叔丁基間甲酚 Cas No.:88-60-8 分子式:C11H16O 分子量:164.25 含量:98%CAS:112022-83-0價(jià)格,(R)-2-甲基-CBS-氧雜硼啶單水合物價(jià)格,250mgCAS:141-90-2,2-硫脲嘧啶,英文名稱:2-ThiouracilCAS:121-89-1,間硝基苯乙酮,英文名稱:3′-NitroacetophenoneCAS:89466-08-0,2-羥基苯硼酸,97%價(jià)格|現(xiàn)貨,Hydroxyphenylboronic Aci,0.9796T/48T,人(TGFβ2),轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2Elisa試劑盒,Human transforming growth factors β2,TGFβ2 ELISA試劑盒 CAS:110-03-2,2,5-二甲基-2,5-己二醇,純度:99%,規(guī)格:5g編號(hào):bs-0585R,Smad4抗體,Anti-Smad4(Mothersagainstdecapentaplegichomolog4),Anti-Smad4(Mothersagainstdecapentaplegichomolog4)CAS:48234-64-6,(三苯甲基)三苯基氯化磷,純度:98%,規(guī)格:10g苯甲醚,規(guī)格及包裝:AR,500ml硝酸鈰,規(guī)格及包裝:AR,25gCAS:6315-90-8價(jià)格,4,5-亞甲基-2-硝基肉桂酸價(jià)格,5gCAS:106950-18-9,4-Phenyl-2-(4-pyridyl)thiazole,純度:97%,規(guī)格:1g
人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒 查詢elisa產(chǎn)品庫
elisa規(guī)格:48T盒/96T盒
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種類:進(jìn)口分裝和原裝、國(guó)產(chǎn)【人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒 】
人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒 注意事項(xiàng):1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒
硼酸,Boricacid,產(chǎn)地:Amresco[分],規(guī)格:500g大孔吸附樹脂D101(0.3-1.25mm),規(guī)格型號(hào):500gCAS:1303-96-4價(jià)格,十水四硼酸鈉價(jià)格,500gCAS:294-80-4價(jià)格,1,5,9-三氮雜環(huán)十二烷價(jià)格,100mgCAS:23299價(jià)格,1-(4-Chlorophenyl)-2-(isopropylamino)ethanol價(jià)格,33657-49-7|丁酸氯甲酯,產(chǎn)品名稱:丁酸氯甲酯 Cas No.:33657-49-7 含量:98%CAS:110-54-3價(jià)格,正己烷價(jià)格,2.5L現(xiàn)GMS80012.5,石蠟切片彈性纖維(ELASTIC)馬森(MASSON)染色試劑盒,50次現(xiàn)貨,大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體Elisa試劑盒價(jià)格|保質(zhì)量,Rat Urokinase-type Plasminogen Activator Receptor,PLAUR/uPAR ELISA試劑盒,96T/48T,CAS:104197-14-0價(jià)格,4-溴-2,6-二氟苯甲醚價(jià)格,1g特級(jí)胎牛血清,產(chǎn)地:GIBCO,規(guī)格:500MLCAS:2235-01-0價(jià)格,苯甲酮二甲基縮酮價(jià)格,5g人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)Elisa試劑盒價(jià)格,Human tartrate-resistant acid phosphatase 5b,TRACP-5b ELISA試劑盒,96T/48TCAS:634-47-9價(jià)格,2-氯-4-甲基喹啉價(jià)格,5g10XTBS洗滌液500mlCAS:123-91-1價(jià)格,1,4-二氧六環(huán)價(jià)格,4x1L丙三醇,規(guī)格:GR,單位:500mlCAS:105-11-3價(jià)格,對(duì)苯醌二肟?jī)r(jià)格,50gCAS:171364-80-0價(jià)格,4-(甲氧羰基)苯硼酸頻哪酯價(jià)格,1gCAS:621-84-1價(jià)格,氨基甲酸芐酯價(jià)格,25gCAS:580-16-5價(jià)格,6-羥基喹啉價(jià)格,5gCAS:1314-56-3價(jià)格,氧化磷(V)價(jià)格,500g二乙胺基鎵價(jià)格,500mgCAS:15329-69-8價(jià)格,N-芐基馬來酸價(jià)格,5gCAS:108-18-9價(jià)格,二異丙胺價(jià)格,1LHuman OAZ1 PrimerCAS:13678-59-6價(jià)格,2-甲基-5-(甲基硫代)呋喃價(jià)格,2gCAS:37699-43-7價(jià)格,2,3-二甲基-4-硝基吡啶N-氧化物價(jià)格,1gCAS:108-10-1價(jià)格,4-甲基-2-戊酮價(jià)格,500mlCAS:77-73-6價(jià)格,二聚環(huán)戊二烯價(jià)格,100mlCAS:132741-30-1價(jià)格,2,4-二氟苯基乙醇酸價(jià)格,1g239087-12-8|3-氟-5-(三氟甲基)苯基乙腈,產(chǎn)品名稱:3-氟-5-(三氟甲基)苯基乙腈CasNo:239087-12-8分子式:C9H5F4N分子量:20314含量:98%CAS:136-51-6價(jià)格,2-乙基己酸鈣鹽價(jià)格,5g胍,GuanidineHcl,產(chǎn)地:Amresco[分],規(guī)格:500gCAS:1254000價(jià)格,7-氯-2H-1,4-苯并噻唑-3(4H)-酮價(jià)格,1g
人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒等相關(guān)ELISA試劑盒產(chǎn)品說明書下載地址:http://www.shxysw.net/shxysw-Article/ 注意事項(xiàng)
1. 當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩,避免起泡。
2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
3. 一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。
5. 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以稀釋倍數(shù)。
6. 在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí),請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。
7. 底物請(qǐng)避光保存。
8. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 產(chǎn)品保存條件:低溫
產(chǎn)品范圍:
人,小鼠,大鼠,豬,兔,其它動(dòng)物細(xì)胞因子;細(xì)胞凋亡,活性多肽、自身抗體 ,血栓與止血,
骨代謝,肝纖維化,腫瘤,激素內(nèi)分泌、自身抗體科研ELISA檢測(cè)試劑盒
提供實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)
特異性:本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的,且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。
有效期:6個(gè)月
預(yù)期應(yīng)用:ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量。
說明
1.試劑盒保存:-20℃(較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí));2-8℃(頻繁使用時(shí))。
2.濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
3.中、英文說明書可能會(huì)有不一致之處,請(qǐng)以英文說明書為準(zhǔn)。
4.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
實(shí)驗(yàn)原理
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。需要而未提供的試劑和器材
1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2. 高速離心機(jī)
3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測(cè)樣品較多時(shí),最好用多通道移液器
6. 蒸餾水,容量瓶等
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。
3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. 生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
標(biāo)本的采集及保存
1. 血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
標(biāo)本的稀釋原則:
首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量,確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi),檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中,應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。最后計(jì)算濃度時(shí),稀釋了“N”倍,標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制150 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則:
臨用前以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔100μl),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標(biāo)記抗體加990μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則:
臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔100μl),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
操作步驟
實(shí)驗(yàn)開始前,請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭,試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時(shí),用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?瞻卓准訕悠废♂屢100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
注:
1. 用戶在初次使用試劑盒時(shí),應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。
2. 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
3. 為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
4. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,請(qǐng)于2-8℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液。
5. 建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
洗板方法手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),OD值為縱坐標(biāo)(普通坐標(biāo)),在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。 更多產(chǎn)品信息,請(qǐng)點(diǎn)擊進(jìn)入公司網(wǎng)址:www.shxysw.net
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人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒(酶聯(lián)檢測(cè)) ELISA的基本原理有三條:(1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學(xué)活性;(2)抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;(3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。酶聯(lián)免疫(ELISA)使用試劑盒檢測(cè)過程中值得關(guān)注的問題1、儀器質(zhì)控 為使儀器保持最佳工作狀態(tài),應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP),所要控制的儀器包括移液器(加樣槍)、溫箱、洗板機(jī)和酶標(biāo)儀!蛞埔浩鳎 ELISA加樣量。20-200μl),其準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,利用稱重法檢查:低、中、高三個(gè)刻度分別吸取指示量的水,萬分之一天平稱重后計(jì)算吸量是否準(zhǔn)確,一般應(yīng)在±5%以內(nèi);◎恒溫箱: 經(jīng)常檢查恒溫箱溫度計(jì)所示的溫度和水中(或溫箱內(nèi))實(shí)測(cè)溫度是否一致,允許有±1℃的誤差;◎洗板機(jī): 每個(gè)廠家設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定,一般不超過2μl;人工扣板時(shí),墊紙不濕;定期檢查管孔是否堵塞;◎酶標(biāo)儀:經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分,防止濾光片霉變,定期檢測(cè)校正,使其保持良好的工作性能。2、試劑盒選擇◎應(yīng)盡量選擇正規(guī)廠家,產(chǎn)品經(jīng)相應(yīng)政府部門審核認(rèn)可,試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、安全性及經(jīng)濟(jì)性全面評(píng)價(jià)。◎靈敏度:有二層含義,1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的最低量的能力;2)為試劑對(duì)大量樣品中陽性檢出的能力!蛱禺愋裕撼S媒徊娣磻(yīng)率表示。含有與待測(cè)物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng),使測(cè)定結(jié)果升高,可能導(dǎo)致假陽性,所以交叉反應(yīng)是評(píng)價(jià)其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)!蚓芏龋篍LISA試劑一般指其批內(nèi)CV%,其值應(yīng)小于15%;定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍!驕(zhǔn)確度:通過添加回收實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)!蚝(jiǎn)便性:指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下,實(shí)驗(yàn)和測(cè)定步驟越少越好,在定性實(shí)驗(yàn)中結(jié)果判斷簡(jiǎn)單明了,定量試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算也應(yīng)簡(jiǎn)單。◎安全性:指試劑對(duì)操作者和環(huán)境安全無害無傳染性!蚪(jīng)濟(jì)性:試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本,而市場(chǎng)價(jià)格比較合理。◎試劑評(píng)價(jià):需要有權(quán)威的確證方法和確證的樣品進(jìn)行檢測(cè)。3、樣本前處理注意事項(xiàng)3.1 均質(zhì)組織樣本:肉、肝食品類切細(xì),用絞肉機(jī)反復(fù)絞碎,混合均勻。水產(chǎn)樣本:去除樣品的非食用部分,食用部分切細(xì),用均質(zhì)器均漿;原料表面較臟時(shí),需適當(dāng)用蒸餾水清洗。蛋類:鮮蛋去殼,蛋黃和蛋白充分混勻。水果、蔬菜類:先用水洗去泥沙,然后除去表面的水分,取食用部分。3.2 振蕩提取 將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中,振蕩,使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部,提取待測(cè)組分。3.2.1振蕩方式:振蕩器上進(jìn)行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。3.2.2 在組織樣本中加入有機(jī)溶劑之間提取時(shí),應(yīng)邊加邊振蕩,防止組織凝結(jié)成團(tuán),不利于提取。3.3. 在用有機(jī)溶劑提取過程中,如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,解決的方法有:①用細(xì)頭輕輕的攪拌,破壞乳化后,再重復(fù)離心。②再加入適量的提取劑,重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。3.4 濃縮 由于凈化過程中引入的溶劑,可能會(huì)降低待測(cè)組分的濃度或者不適宜直接分析,需要去除全部有機(jī)溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮?dú)庀麓蹈,再用?fù)溶液溶解干燥殘留物。濃縮方式: 氮?dú)獯蹈沙s、壓縮空氣吹干除雜。注意:3.4.1在吹干樣本之前,用甲醇清洗針頭,防止雜質(zhì)干擾。3.4.2在吹樣本時(shí),針頭應(yīng)在液面上空,避免與樣本接觸,防止產(chǎn)生交叉污染。3.4.3樣本吹干后應(yīng)立即取下,避免吹的時(shí)間過長(zhǎng),影響最終檢測(cè)結(jié)果。3.4.4不同的藥物,吹干后樣本的保質(zhì)期不同,提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。3.5 凈化 經(jīng)過提取的待測(cè)組分中通常含有一些會(huì)干擾試劑盒中抗原抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測(cè)物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測(cè)組分與雜質(zhì)分離的過程,我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的最常見的凈化是:液液分配法。 比如:用復(fù)溶液溶解干燥殘留物之前先加入適量的正己烷,在加入正己烷和復(fù)溶液渦動(dòng)后如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,可以60℃水浴加熱,至乳化現(xiàn)象消失或減弱后,加大離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心。 實(shí)例: A、氟喹諾酮類藥物試劑盒現(xiàn)有的水產(chǎn)樣本前處理方法中,用二氯甲烷作為提取劑。注意: (a)二氯甲烷的密度比水大,離心完后,二氯甲烷在下層,須先用加樣器吸盡上層廢液后,再按要求取適量的下層吹干。 (b)在用加樣器吸取下層的有機(jī)相時(shí),正常操作往往取量不準(zhǔn)確,此時(shí)最好用帶有刻度,且刻度較準(zhǔn)確的玻璃管來定量。 (c)上訴情況對(duì)有經(jīng)驗(yàn)的試驗(yàn)員還可以通過靈活控制加樣器來控制取樣的準(zhǔn)確性。 (d)在振蕩過程中要注意安全。二氯甲烷在振蕩的過程中,如果離心管密封性不是很好,往往容易爆開;在進(jìn)行振蕩時(shí),不要讓離心管口對(duì)準(zhǔn)自己或者其他人,避免濺到自己或者他人身上。 (e)試劑盒在使用前充分回溫很必要,如回溫不充分該項(xiàng)目曲線受影響較明顯。 B、硝基呋喃代謝物檢測(cè)過程中常見問題 硝基呋喃代謝物有四種:3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ)、5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)和1-氨基-2-內(nèi)酰脲(AHD)在檢測(cè)過程中也需要同其它項(xiàng)目一樣進(jìn)行添加回收測(cè)評(píng),其中需要注意以下幾個(gè)問題。 代謝物在組織中是與蛋白呈結(jié)合狀態(tài),采用普通的有機(jī)溶劑或緩沖液,是無法提取該代謝物的。需要用鹽酸水解后才能使呋喃類代謝物游離,所以在加入去離子水、鹽酸和2-硝基苯甲醛(2-NBA)混合均勻后,其pH應(yīng)在1-3之間,否則不利用水解代謝物。在衍生化過程中,溫度和時(shí)間決定其衍生化產(chǎn)率,衍生化后在加入氫氧化鈉和磷酸氫二鉀時(shí),其pH應(yīng)在中性左右。由于部分樣本的緩沖能力不同,所以需對(duì)其pH進(jìn)行測(cè)定,因?yàn)樵谒嵝曰驂A性環(huán)境中,不利于呋喃類代謝物的提取回收,同時(shí)也容易出現(xiàn)假陽性。 添加回收的幾種誤區(qū): 呋喃類代謝物提取過程通常分三個(gè)關(guān)鍵步驟: 水解-----衍生化-----提取 (1)采用標(biāo)準(zhǔn)曲線的最大標(biāo)準(zhǔn)濃度進(jìn)行添加回收。如德國(guó)拜發(fā)和我公司AOZ試劑盒中的第6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)4.05ppb,AMOZ試劑盒中的第6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)8.1ppb。因?yàn)檫@些標(biāo)準(zhǔn)品是已經(jīng)過衍生化后的標(biāo)準(zhǔn)品,不能代表樣本前處理實(shí)驗(yàn)中的加酸水解和加衍生化試劑衍生這兩個(gè)步驟,所以就算回收率很高,但失去了實(shí)際參考價(jià)值。 (2)完全依賴未衍生的代謝物標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行添加回收。因部分未衍生的代謝物在配制成標(biāo)準(zhǔn)品后有一定的有效期,會(huì)存在潛在的不穩(wěn)定因素,而且添加回收僅能考證衍生化和提取兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn),不能驗(yàn)證從組織蛋白中水解呋喃類代謝物的過程,因此也有一定的局限性。 最好的評(píng)價(jià)方案:采用經(jīng)LC-MS-MS確證的陰陽性樣品,留作質(zhì)控樣品,對(duì)檢測(cè)的樣本和試劑盒進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。這也是實(shí)驗(yàn)室所出數(shù)據(jù)可信度最具說服力的關(guān)鍵點(diǎn)。4、 酶標(biāo)分析過程中的注意事項(xiàng) 樣本的檢測(cè)是基于抗原抗體的反應(yīng),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,判定樣本最終的藥物含量。它要求加樣的準(zhǔn)確性和洗板的一致性。在整個(gè)加樣的過程中注意實(shí)驗(yàn)室溫度的恒定,保證反應(yīng)在試劑盒所示的溫度下進(jìn)行。4.1常見加樣方式A、吸一打二B、吸二打一 在實(shí)際操作過程中,提倡用“吸二打一”用這種方式,有如下幾個(gè)好處: a、加樣過程中在板孔內(nèi)不出現(xiàn)或者很少出現(xiàn)氣泡 b、提高加樣速度,縮短前后樣本反應(yīng)的時(shí)間差。在加樣的過程中還應(yīng)細(xì)心注意避免出現(xiàn)下列現(xiàn)象:A、加樣的過程中漏加或者重加;B、加樣的過程中忘記更換吸頭;C、樣本的重加或者漏加;D、忘記記錄樣本的加樣順序。4.2常見的洗板方式A、洗板機(jī)洗板;B、多道孔加樣器洗板;C、多孔吸頭洗板; 在洗板的過程中,確保每孔所加洗滌液量的均一,按說明書操作,不可過多,避免溢出板孔,污染其它樣本;過少,則達(dá)不到洗滌的效果,容易出現(xiàn)曲線不成線性,花板等情況。4.3 甩板 快速甩盡板孔內(nèi)的液體,防止板孔里的液體對(duì)流或反濺回板孔中產(chǎn)生交叉污染。4.4拍板 輕輕的在吸水紙上扣干板孔內(nèi)的液體,而且吸水紙只能使用一次。4.5 顯色 值得注意的是,并非試劑盒中所規(guī)定的顯色時(shí)間是絕對(duì)的,因?yàn)樵噭┖械奈舛戎禃?huì)受環(huán)境中的溫度、濕度、酶標(biāo)板反應(yīng)時(shí)所接觸到的物品的導(dǎo)熱度等有關(guān),實(shí)驗(yàn)操作人員在加完顯色液后,可根據(jù)顏色的深淺適當(dāng)?shù)难娱L(zhǎng)或者縮短顯色時(shí)間。防止出現(xiàn)吸光值接近或高于酶標(biāo)儀的最高檢測(cè)靈敏度(OD值在2.5-3.0之間),這樣會(huì)間接影響到檢測(cè)結(jié)果,如出現(xiàn)曲線前半部份梯度不明顯或顛倒數(shù)值等現(xiàn)象,也就造成了一些假陽性或部分檢測(cè)結(jié)果偏低的現(xiàn)象。 人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒(酶聯(lián)檢測(cè)) 下面將ELISA法與免疫熒光(IFA)和放射免疫(RIA)的各自優(yōu)缺點(diǎn)作一簡(jiǎn)要的比較(表4),供參考:表4:三種方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較:
方法種類 比較指標(biāo) | | | |
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