人一氧化碳血紅蛋白(HbCO)ELISA 試劑盒
產品名稱: | 人一氧化碳血紅蛋白(HbCO)ELISA 試劑盒 | |||||
產品英文名稱: | Human carboxyhemoglobin,HbCO ELISA kit | |||||
規(guī)格: | 48T/96T | |||||
檢測方法: | 雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA) | |||||
標本: | 血清,血漿,細胞上清液,組織等 | |||||
種屬: | Human\\人 | |||||
試劑盒說明書: | 請來電或者郵件索取 | |||||
人一氧化碳血紅蛋白(HbCO)ELISA 試劑盒 | ||||||
實驗材料與試劑配制: | ||||||
1. 儀器與材料:酶標儀(使用前預熱30分鐘,微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。 | ||||||
2. 洗液的配制:按 1:100的比例配制洗液備用。 樣品收集、處理及保存 | ||||||
1. 細胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集上清液,以1000×g離心15 | ||||||
分鐘,收集上清。 | ||||||
2. 細胞:用PBS反復洗滌細胞 3次,調整細胞濃度達到10^4-10^6/ml左右,通過反復凍融, | ||||||
使細胞破壞,并放出細胞內成份;蛘呒毎暦鬯椋x心取上清液檢測。 | ||||||
3. 血清: 在室溫 下, 血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。 | ||||||
4. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置 10 -20 分鐘后, | ||||||
以1000×g離心15分鐘,收集上清。 | ||||||
5. 體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集 ,以 1000×g | ||||||
離心、15 分鐘 ,收集上清。 | ||||||
6. 組織標本:切取 組織標本,稱取重量0.5mg加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,超聲破碎儀, | ||||||
將標本勻漿,以2000 -300rmp離心 20 分鐘 ,收集上清進行檢測 。 | ||||||
7. 樣品 中不能含有 NaN3,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的( HRP)活性。 | ||||||
8. 保存 :如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-80 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn) | ||||||
沉淀,應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高脂。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心 | ||||||
或過濾。不要在 37 ℃或更高的溫度加熱解 或更高的溫度加熱解 或更高的溫度加熱解或更高的溫度 | ||||||
加熱解或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解并確保樣品均勻地充分解凍。 | ||||||
人一氧化碳血紅蛋白(HbCO)ELISA 試劑盒 | ||||||
操作步驟 : | ||||||
1. 取出 試劑盒,室溫( 20 -25 ℃)放置 30 分鐘。 | ||||||
2. 分組: 取出 96 孔板 根據(jù)待測樣品數(shù) 量加上標準品的數(shù)量決定所需板條,把剩余的板條繼續(xù) | ||||||
冷藏處理,分別設標準品組(6個濃度)、空白 孔、待測樣品組。 | ||||||
注:為減少實驗誤差,保證準確性,建議設置復孔。 | ||||||
3. 加樣:依照標準品的順序分別加入100ul 的標準品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入100ul的 | ||||||
蒸餾水;其余微孔中加入100ul的待測樣本。 | ||||||
4. 加酶標溶液:標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul 的酶標溶液 (空白對照孔除外)。 | ||||||
5. 溫育:酶標板用封板紙密封后,放入濕盒內于 37 ℃恒溫孵育恒溫孵育 1小時。 | ||||||
6. 洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15 -30s 30s,充分清洗酶標板5次,用吸水紙徹底拍干。 | ||||||
7. 顯色:各孔加入顯色劑A液 50ul 后,再加入顯色劑 B液 50ul 。 | ||||||
8. 終止: 25 -37 ℃下避光反應10 -15分鐘, 加入 50 ul 終止液。 | ||||||
9. 讀板:在 450nm波長讀取各孔的O 值。注: 讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡, | ||||||
讀板時間控制在終止反應后的30 分鐘內,以免影響準確性。 | ||||||
人一氧化碳血紅蛋白(HbCO)ELISA 試劑盒 | ||||||
數(shù)據(jù)計算 | ||||||
1. 繪制標準曲線:各標準品 OD 值減去底色即堅強空白孔OD 值(數(shù)據(jù)處理如下),繪制標準曲線圖。 | ||||||
1.1軟件處理:建議用戶使logit-log模式或四參數(shù)據(jù)處理模式( y=(a-d)/(1+(x/c)^b)+d ) | ||||||
1.2計算器或手工作圖處理:Logit-log 計算:以6個標準品OD 值的 Logit為縱坐標 y,以標準品的 | ||||||
濃度的 log值為橫坐標X,繪制曲線圖。logit值計算公式如下:logit=ln(B/ B0)(1-B/ B0)手工 | ||||||
作圖:以標準濃度取log值為橫坐標,對應的logit值為縱坐標,在普通坐標紙上或以標準濃度為 | ||||||
橫坐標,對應的 B/B0B為縱坐標在 logit-log坐標紙上畫出標準曲線(理想化時是一條直)。 | ||||||
2. 根據(jù)待測樣品的B/B0可以從坐標紙上查出樣品的濃度值。注意:如果使用普通坐標紙,查出的 | ||||||
數(shù)值應取反對數(shù)才是*后濃度值。 | ||||||
3.敏感度:1.0µmol/L | ||||||
人一氧化碳血紅蛋白(HbCO)ELISA 試劑盒 | ||||||
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關鍵詞:人一氧化碳血紅蛋白 HbCO